當經(jīng)熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中,被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液,在鞘液的包裹和推動下,細胞被排成單列,以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體,充電后振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷,當液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時,在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),落入各自的收集容器中,沒有充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實現(xiàn)細胞的分離。 [1]
,從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細胞分析技術(shù),它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單克隆分選,能復(fù)雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時對其中一種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等,可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%,保證樣本中目標細胞的高回收率。 [2]
流式細胞分選儀
流式細胞分選儀
特點編輯
1. 少量細胞分選時,流式細胞分選精確度高(99%以上),速度快。的流式細胞儀的分選速度可達25000個細胞/秒以上,比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍,需要一天的工作只需要幾小時就能完成。不過流式細胞儀分離細胞的量還是有一定的限制,一次分離的大合理量約為10個細胞。如果細胞量超過10個,則需要耗費10小時以上,分選后細胞的活力會受到很大的影響.
2. 可以同時進行多個Marker分選,正選負選同時進行。以前的流式細胞儀只能給液滴充上正電荷或負電荷,因此在電場中只能向左或向右偏轉(zhuǎn),即兩路分選。儀器可以給液滴充以不同的電量,從而調(diào)整液滴的偏轉(zhuǎn)角度,實現(xiàn)多路分選。BD的FACSAria流式細胞儀就可以進行四路分選。
3. 不僅僅限于表面抗原,流式細胞儀可以根據(jù)任何能檢測到的發(fā)光度(如細胞體積)或熒光(如DNA、RNA或蛋白含量,酶活性,特異抗原)散射度差異來分離細胞。如果能保證流式細胞儀的無菌狀態(tài),那么分選后的細胞還可以進行培養(yǎng)或其他分析。
4. 如果只是偶爾做幾次細胞分選的話,用流式分選還是比較劃算的,只需要準備樣品和抗體,交納一定的儀器使用費即可,不需要購買配套的設(shè)備。 [3]
應(yīng)用編輯
流式細胞分析/分選系統(tǒng)主要應(yīng)用于: [4] 1)干細胞組織工程在研究;2)細胞增值、活性和凋亡研究;3)疾病細胞如炎癥細胞、腫瘤細胞等的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸研究;4)基因表達和表達調(diào)控研究;5)細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和生物大分子間相互作用研究;6)各種病原體如病毒、細菌等基礎(chǔ)和致病性和致病機理研究;7)藥理藥效和藥物開發(fā)研究;8)移植和細胞治療研究;9)生物材料對細胞結(jié)構(gòu)、活性和功能的影響等。利用儀器的分選功能分選得到高純度、高活性的稀有細胞,通過直接培養(yǎng)、誘導(dǎo)、增殖、分化、活化和移植等進行更深一步的細胞功能和細胞治療探索,還可以在此基礎(chǔ)上逆向進行基因組合蛋白質(zhì)組相關(guān)研究,尋找致病基因、致病蛋白和疾病信號傳導(dǎo)方式。
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