名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
Phusion DNA聚合酶 | 100 U | 1198元 |
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本產品是Phusion DNA Polymerase基因經過原核表達，并經多次純化分離得到。該酶是由高保真Pfu DNA聚合酶和*的雙鏈DNA結合蛋白Sso7d融合而成，它具有下列特點：
1. *的DNA持續合成能力，合成DNA能力分別是Pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶的10倍和2倍。
2. 快速，相比常用的DNA聚合酶，合成時間大大縮短，延伸速率為15-30s/kb。
3. 可以短時間內高效、高保Phusion DNA聚合酶真擴增長片段DNA，長可以擴增20Kb。
3. 具有5’-3’和3’-5’核酸外切酶活性，是目前保真度的熱穩定性聚合酶，保真性是Taq DNA聚合酶的50倍, Pfu DNA聚合酶的6倍。
4. 擴增的PCR產物為鈍端雙鏈DNA，不能直接用于AT克隆。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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