Tth DNA聚合酶
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
Tth DNA聚合酶 | 250U | 詢價 |
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本酶來源于嗜熱菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二價陽離子存在的情況下，具有DNA多聚酶活性。它與Taq酶一樣被廣泛用于PCR反應，但耐熱性比Taq酶高，因此對高GC含量模板的PCR也有較好的效果。本酶基本上沒有3'→5'外切酶活性及5'→3'外切酶活性，所以也可用于雙脫氧法測序。另外，本酶具有RTase 活性，在Mn2+存在的情況下，RTase活性會得到強化。利用該特性，可以用來在同一管中進行逆轉錄反應和PCR反應，即一步法RT PCR。（但是，在Mn2+存在時，RT-PCR的準確性不高）此外，本酶與Taq DNA多聚酶一樣，PCR產物可通過T載體進行TA克隆。它具有下列特點：
1. RT-PCR反應的特異性增加：在較高的溫度下進行逆轉錄，增加了引物雜交和延伸的特異性。
2. 二級結構減少：在較高的溫度下進行逆轉錄，減少了由于RNA二級結構引起的問題。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相， 離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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