Long-Taq DNA聚合酶
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
Long-Taq DNA聚合酶 | 500 U | 119元 |
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本產品由在普通Taq DNA聚合酶進行基因工程優化的快速DNA聚合酶基礎商制成的混合酶，配以專為長片段PCR優化的反應緩沖液，特別適合對長片段的擴增。LF-Taq 擴增性能優異, 能在短時間內完成高效的PCR擴增.用普通Taq DNA聚合酶的進行PCR反應延伸時間一般為1kb/min,快速DNA聚合酶為1kb/10-15 sec,進行8kb產物的PCR反應可在1小時內完成. LF-Taq對簡單模板的擴增可達40kb,對復雜模板的擴增也可達20kb.本制品使用領產工藝生產,經過兩次過柱純化,純化>98%,*去除外源蛋白和核酸污染。其特點如下：
1. 為長片段擴增特別優化，使用常規PCR Buffer即可擴增8-10kb，使用超長Buffer擴增長度可達20-40kb。
2．反應速度快，聚合速度高達10-15sec/kb，可為科研人員節約多達70%的實驗時間。
3．擴增效率高，同等條件下產量遠高于普通Taq酶，在擴增片段時優勢尤其明顯。
4．比活性高，分子量小于普通Taq酶。在相同酶量下有更高的酶活性。
5．低背景，顯著減少非特異性條帶和引物二聚體。
6．高穩定性，耐熱性能，Long-Taq酶的T1/2=2.5-3 hour（100℃），12 hour（95℃），普通Taq酶的T1/2=1.6 hour（95℃），特別適合對高GC含量的模板的擴增。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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