即用型EMSA試劑盒
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即用型EMSA試劑盒 | 100次 | 詢價 |
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凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobility shift assay),也稱gel shift,是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通過EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的結合情況,從而可以研究細胞內一些轉錄因子的激活水平。本產品具有下列特點:
1. 一站式,使用方便,本試劑盒提供了進行EMSA實驗的探針標記、蛋白和DNA
結合以及EMSA上樣等的主要試劑,使EMSA實驗變得簡單方便。
2. 非特異性結合低,EMSA結合緩沖液中含有poly(dI-dC)等有效成分,其中
poly(dI-dC)的濃度經過優化,可以很好的消除蛋白和標記探針間的非特異性結
合,同時又不會減弱目的轉錄因子和標記探針間的結合。
3. 本試劑盒足夠標記10-20次探針,足夠進行100個蛋白和探針的結合反應。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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