克必隆RACE試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
克必隆RACE試劑盒 | 10次 | 詢價 |
|
本產(chǎn)品是常規(guī)5′-RACE試劑盒的改良版,主要特點是整合了本公司的Enhanced Template Switch(eTS,增強型模板轉(zhuǎn)換)技術(shù)和單細胞RNA擴增技術(shù),改良后的本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 整合的eTS技術(shù)極大提高了獲得5′端全長的cDNA機率。
2. 整合的單細胞RNA擴增技術(shù)使總RNA的低使用量可以降低到ng級。
3. 提供常規(guī)和超敏兩種使用模式,前者在逆轉(zhuǎn)錄后直接進行RACE擴增,適用于ug級總RNA;后者是在逆轉(zhuǎn)錄后*行無選擇性cDNA擴增,再進行RACE擴增,適用于ng級總RNA。
4. 逆轉(zhuǎn)錄和加尾一管式完成,免去繁瑣的優(yōu)化步驟和在純化過程中樣品的丟失。
5. 本試劑盒提供的逆轉(zhuǎn)錄試劑足夠10次20uL體系的常規(guī)法eTS逆轉(zhuǎn)錄反應或20次5 uL體系的超敏法eTS逆轉(zhuǎn)錄反應,本試劑盒提供的PCR試劑足夠360次50 uL體系的PCR反應。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表:
兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA kit
兔血管生成素2(ANG-2)ELISA Kit
兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA Kit
兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA Kit
兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA Kit
兔血清總補體(CH50)ELISA Kit
兔血栓素B2(TXB2)ELISA Kit
兔血纖蛋白原(Fbg)ELISA Kit
兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA Kit
兔一氧化氮(NO)ELISA Kit
兔一氧化氮合成酶(NOS)ELISA Kit