DOP-PCR試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
DOP-PCR試劑盒 | 50次 | 1680元 |
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DOP-PCR即Degenerated Oligonucleotide Primed PCR(簡(jiǎn)并寡核苷酸引物聚合酶鏈反應(yīng)),它與普通PCR的區(qū)別在于其使用單一的半簡(jiǎn)并引物和低復(fù)性溫度,半簡(jiǎn)并引物由特定序列+簡(jiǎn)并序列+特定序列三部分組成,因此沒有種屬特異性,也跟DNA的復(fù)雜性無關(guān),能均勻地?cái)U(kuò)增真?zhèn)€基因組,尤其適用于痕量DNA樣品的擴(kuò)增。本產(chǎn)品是在經(jīng)典DOP-PCR基礎(chǔ)上經(jīng)過精心優(yōu)化而來,產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 改進(jìn)了DOP-PCR的循環(huán)參數(shù)。
2. 優(yōu)化的引物濃度,使自連序列和非模板相關(guān)序列的合成。
3. 可使用各種來源的樣品,包括全血,干血,發(fā)根,口腔粘膜刮液培養(yǎng)細(xì)胞,真菌和病毒等。
4. 操作簡(jiǎn)便快捷,恒溫(30℃)反應(yīng),無須PCR儀即可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增。
5. 產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn),包括多重PCR、長(zhǎng)片斷PCR、定量PCR、克隆、文庫構(gòu)建、單倍型分析、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析(片段差異,微衛(wèi)星差異,SNP,STR)等。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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