KM 71酵母菌
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
KM 71酵母菌 | 1 管 | 詢價 |
|
KM71是畢赤酵母菌株，屬于真核細胞。具有氨芐和卡納抗性。質粒轉化的條件為電轉化，應用于蛋白表達。適宜生長溫度是28至30度，一般可以設置在30度培養，溫度超過32度對蛋白的表達是有害的，并可能導致細胞的死亡。本菌株是組氨酸缺陷型（His4基因型），如果表達載體上攜帶有組氨酸基因，可補償宿主菌的組氨酸缺陷，因此可以在不含組氨酸的培養基上篩選轉化子。這些受體菌自發突變為組氨酸野生型的概率一般低于10-8。KM71畢赤酵母可以在YPD培養基中生長，或者在補充有組氨酸的minimal media中生長，但是無法在單獨的minimal media培養基中生長。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
相關產品列表：
氯霉素干粉
氯霉素溶液,25mg/mL
環孢霉素A溶液,10mg/mL
細胞松弛素B溶液,20mg/mL
地塞米松溶液,50mg/mL
紅霉素溶液,100mg/mL
遺傳霉素（G418）干粉
潮霉素B干粉
硫酸慶大霉素溶液,15mg/mL
硫酸卡那霉素溶液,50mg/mL
硫酸卡那霉素干粉
硫酸新霉素干粉
新生霉素溶液,50mg/mL
制霉菌素溶液,2mg/mL
土霉素鹽酸鹽溶液,100mg/mL
青霉素G鉀鹽溶液,200mg/mL
青霉素G鈉鹽溶液
多粘菌素 B 硫酸鹽
嘌呤霉素干粉
利福平溶液,100mg/mL
壯觀霉素溶液,50mg/mL
鏈脲佐菌素溶液,10mg/mL
硫酸鏈霉素溶液,50mg/mL
