超快核酸電泳液干粉
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
超快核酸電泳液干粉 | 20L | 詢價 |
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本產品是聯(lián)邁基因在超快DNA電泳液SuperBuffer的基礎上開發(fā)出的又一新產品。它既可用于DNA的快速電泳(取代傳統(tǒng)的TBE和TAE 電泳緩沖液),又能用于RNA的快速電泳(取代MOPS/甲醛電泳液)。它不但能大大縮短DNA和RNA電泳的時間,還使DNA膠回收率比TAE和TBE膠高2-3倍。使用本產品,實驗室準備工作更加簡單,再也不需要準備多種緩沖液。
1. 快速,用以較高電壓電泳DNA和RNA電泳時,比常規(guī)電泳緩沖液高2-5倍(當然,也可以使用跟常規(guī)TBE、TAE和MOPS一樣的電壓進行電泳)。一般DNA電泳檢測(如PCR檢測)只需要5-10分鐘即可。
2. 瓊脂糖用量少(一般電泳用0.6-0.8%瓊脂糖即可),節(jié)約成本。
3. DNA膠回收率是TAE和TEB膠回收率的2-3倍,總回收率為80-90%(對1 kb左右的DNA片段)。
4. 方便,加水即用。既適用于DNA,又適用于RNA,在同一塊凝膠上可以同時電泳DNA和RNA兩種不同的核酸,再也不需要預配多種緩沖液。
5. 對鹽離子的耐受能力比SuperBuffer更強,含鹽反應液(如PCR,酶切DNA產物等)也能直接電泳并得到很好的分辨率,不需要脫鹽處理。
6. 由于組成成分不含氨基,故可以使用DEPC處理以去除RNase(Tris 和MOPS由于含氨基,故不能用DEPC直接進行RNase滅活處理)。
7. 價格跟市場上的TAE、TBE和MOPS預配液相當。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相, 離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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