大提柱式細菌DNAout
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大提柱式細菌DNAout | 4次 | 詢價 |
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本產品在LMAI Bio柱式細菌DNAOUT（CAT#:60802）基礎上改良而得的大提升級產品，主要用于大量快速從各種革氏陽性和革氏陰性細菌材料中提取基因組DNA。跟柱式細菌DNAOUT相比，它具有下列特點：
1. 處理量大，一次可以處理30 mL的飽和菌液。
2. 純度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制劑，得到的DNA可以不經稀釋直接用于酶切、PCR、 real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting等各種后續分子生物學實驗。
3. 產率一般在5 μg/mL細菌樣品。離心吸附柱大吸附量為200 μg。
4. DNA段長度一般在20-40 Kb左右。
5. 適用范圍廣，適用于絕大多數常見的細菌材料。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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