操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：蛋白磷酸酶抑制劑混合液Ⅰ
英文名稱：Phosphotase Inhibitor Cocktail 1
產品規格：1mL
發貨周期：1～3天
產品貨號：BJ-F0164767
生物醫學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統方法的缺點，本公司開發了本產品。
產品介紹：
組織/細胞裂解時會釋放出大量內源性蛋白磷酸酶，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，導致不同于正常生理狀態的差異，影響實驗結果。因此，加入外源性蛋白磷酸酶抑制劑，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質的磷酸化狀態，是Western Blotting、免疫共沉淀檢測磷酸化蛋白質和蛋白活性測定等研究*的一步。本產品就是針對這一用途開發。 產品特點： 1．即開即用，不需要單獨購買每個成分然后再配制。 2．由5種蛋白磷酸酶抑制劑(釩酸鈉、氟化鈉、鉬酸鈉、酒石酸鈉、咪唑)組成，各成分的濃度經過精心優化。 3．抑制譜廣，能特異性地抑制絲磷酸酶、蘇磷酸酶、酪磷酸酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和ATP酶。 4．與各種細胞裂解液兼容。 5．使用簡單，在細胞裂解液中按一定比例加入即可(根據蛋白磷酸酶決定，一般按1/100的體積比)。 6．適用于Western blot、免疫共沉淀檢測磷酸化蛋白質、蛋白活性測定等試驗。 儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。 使用方法： 1.在臨用前溶解本產品，并按1/100的比例加入到細胞裂解液中(1mL細胞裂解液中加入10μl)。注意：對蛋白磷酸酶含量特別豐富的組織，可以將加入比列提高到1/20-1/50。 2.后續處理按常規方法進行即可。 注意：避免反復凍融本產品，所以次溶化后，如果還有剩余，可將其分裝成小份凍存，每次用多少取多少。 |
使用方法：本產品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發病的3天采集。
在安全柜內將本產品分裝到自備的、螺旋蓋內有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內襯具吸水和緩沖能力的物質。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
分子生物級溴化乙錠（Ethidium Bromide）染色液
（1毫克/毫升）或（10毫克/毫升）
SYBR綠色熒光核酸染色試劑盒（配制25毫升/次）
SYBR綠色熒光核酸染色（20X）
溴酚藍（BROMPHENOL BLUE）溶液（100毫克/毫升）
小鼠胸腺活化調節趨化因子(TARC/CCL17)elisa ，英文名： TARC/CCL17 ELISA Kit
牛β羥(βOHB)ELISA檢測試劑盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T
人8異前列(8-iso-PG)免疫試劑盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit
英文名稱MouseIerleukin-1α,IL-1αELISAkit小鼠白介素1α(IL-1α)規格：96T/48T
冰凍切片組織CASPASE-10蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次
Ratclusterofdiffereiation8,CD8elisa大鼠CD8分子(CD8)elisa規格：96T/48T
蛋白磷酸酶抑制劑混合液Ⅰ小鼠Ⅲ(FⅢ)elisa分析檢測試劑盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa檢測試劑盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa分析檢測試劑盒
小鼠Ⅱ(F2)elisa檢測試劑盒
小鼠Ⅰ(FⅠ)elisa檢測試劑盒
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
