中文名稱：無內毒素質粒中提試劑盒（5～15mL）
英文名稱：Endo-Free Plasmid Midi Kit（5～15mL）
產品規格：50次
發貨周期：1～3天
產品貨號：BJ-F0163408
產品介紹：
本試劑盒通過堿裂解法裂解細胞，新型硅基質膜高效專一的結合質粒DNA，同時采用特殊的緩沖液系統和除內毒素過濾柱，有效去除內毒素、蛋白等雜質。由本試劑盒所得質粒純度高、質量穩定，特別適用于細胞轉染，同時也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化等下游實驗。 內毒素是質粒提取中常見的污染物，由于真核細胞對內毒素非常敏感，因此，如果質粒中含有內毒素會大大降低真核細胞轉染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內毒素質粒的新方法，提取的質粒大限度去除內毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。 保存：室溫(15～30℃) 自備試劑：無水乙醇、異丙醇。 實驗前準備及重要注意事項： 所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環境穩定保存1年，更長時間保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可穩定保存6個月。 次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2～8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復至室溫后使用。 次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。 使用前請先檢查Buffer P2和Buffer E3是否出現結晶或沉淀，如有結晶或沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。 注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應立即蓋緊蓋子。 提取質粒的量和純度與細菌培養濃度、菌株種類、質粒大小、質粒拷貝數等因素有關。 操作步驟： 取5～15mL過夜培養的菌液，加入離心管(自備)中，13000rpm(~16200×g)離心1分鐘收集細菌，盡量吸棄全部上清。 向留有菌體沉淀的離心管中加入500μL Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮細菌沉淀。 注意：如果菌塊未*混勻，將會影響裂解效果，使提取量和純度偏低。 向離心管中加入500μL Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻8～10次，使菌體充分裂解，室溫放置3～5分鐘。此時溶液應變得清亮粘稠。 注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不*，應減少菌體量。 向離心管中加入500μL Buffer E3，立即上下顛倒混勻8～10次，此時出現白色絮狀沉淀，室溫放置5分鐘。13000rpm離心5分鐘，吸取上清，將上清加入過濾柱FM中(已裝入收集管)，13000rpm離心1分鐘過濾，將收集管中的濾液轉移到離心管(自備)中。 注意： ① Buffer E3加入后應立即混勻，避免產生局部沉淀。 ② 吸附柱的大容積為750μL，所以上清液請分兩次過濾，并混合于同一自備離心管中。 向濾液中加入450μL異丙醇，上下顛倒混勻。 柱平衡：向已裝入收集管的吸附柱中加入200μL Buffer PS，13000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 將步驟5中濾液與異丙醇的混合溶液轉移到平衡好的吸附柱(已裝入收集管)中。 13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：吸附柱的大容積為750μL，所以第5步中所得溶液分多次過柱。 向吸附柱中加入750μL Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇)，13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。 將吸附柱重新放回收集管中，13000rpm離心1分鐘。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。 將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中，向吸附膜的中間部位加入100～200μL Endo-Free Buffer EB，室溫放置2～5分鐘，13000rpm離心2分鐘。-20℃保存質粒。 注意： ① 為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2～5分鐘，13000rpm離心2分鐘。Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預熱，適當延長吸附和洗脫的時間，可以增加提取效率。 ② 質粒拷貝數較低或>10kb時，Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預熱，可以增加提取效率。 |
使用方法：本產品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發病的3天采集。
在安全柜內將本產品分裝到自備的、螺旋蓋內有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內襯具吸水和緩沖能力的物質。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
真菌/酵母氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
植物氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
活體組織氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
細胞內氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（過氧亞硝基陰離子）
冰凍切片氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（過氧亞硝基陰離子）
小鼠增殖細胞核抗原 英文名稱： Proliferating Cell Nuclear Aigen 規格： 48T/96T 英文縮寫： PCNA m-Nitrohydrocinnamic acid 中文名： 分子式：C9H9NO4
小鼠早期生長反應因子1 英文名稱： Mouse Early Growth Response Protein 1 規格： 48T/96T 英文縮寫： EGR-1 Nandrolone laurate 中文名：月桂酸諾龍 分子式：C30H48O3 度：98.0%
小鼠載脂蛋白H(Apo-H)elisa Naproxen 22204-53-1 中文名： 分子式：C14H14O3 度：98.0%
小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISAKit Lithocholic acid 中文名：石酸 分子式：C24H40O3
小鼠載脂蛋白E(mouse APO E) 作用： ELISA 規格： 48T/96T 進口分裝 Methylprednisolone acetate 中文名：甲基龍醋酸酯 分子式：C24H32O6
無內毒素質粒中提試劑盒（5～15mL）氧化石蒜堿 HPLC≥98% 20mg Humanmelanoma-associatedaigen,MAGEELISAKit 人黑色素瘤相關抗原(MAGE)elisa 96T/48T 進口分裝
氧化小檗堿 HPLC≥98% 20mg CLIAKitfor26SPSMELISAKit大鼠26S蛋白酶體規格：48T/96T
氧化型 HPLC≥98% 20mg 飲料甘素(dulcin)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20
藥根堿 HPLC≥98% 20mg MouseL-SelectinELISAKit小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)elisa規格：96T/48T
野百合堿 HPLC≥99% 20mg 小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP3)elisa ，英文名： IGFBP3 ELISA Kit
野 HPLC≥98% 20mg 兔子白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T
野黃芩素 HPLC≥98% 20mg 犬肝堿性0酸酶(L-ALP)試劑盒 Canine Liver Alkaline Phosphatase,L-ALP ELISA Kit
野鷲尾苷 HPLC≥98% 20mg 英文名稱HumanIercellularadhesionmolecular1ELISAKIT人細胞間粘附分子1(ICAM-1)(CD54)ELISAKIT規格：96T/48T
野菊花內酯 HPLC≥98% 10mg 大量藍藻菌基因組DNA氯化銫萃取試劑盒5
野馬追內酯A HPLC≥95% 20mg RatIerleukin5,IL-5elisa大鼠白介素5(IL-5)elisa規格：96T/48T
生物醫學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統方法的缺點，本公司開發了本產品。
