生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
中文名稱：無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒（100～300mL）
英文名稱：GoldHigh Endo-Free Plasmid Maxi Kit（100～300 ml）
產(chǎn)品規(guī)格：2次|10次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0163407
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒提供一種簡單快捷高效提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上，采用*的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)，高效專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA；同時采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和去內(nèi)毒素buffer，有效去除內(nèi)毒素、基因組DNA、RNA、蛋白等雜質(zhì)。每次可處理100～300mL菌液，獲得多至2mg轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒DNA，整個提取過程只需50分鐘。本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、提取量大，特別適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，同時也可用于DNA測序，PCR，體外轉(zhuǎn)錄，內(nèi)切酶消化等實驗。 內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見的污染物，由于真核細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，因此，如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會大大降低真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。 保存：室溫(15～30℃) 自備試劑： 無水乙醇、異丙醇。 實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項： 所有組分可在干燥、室溫（15～30℃）環(huán)境穩(wěn)定保存1年，將吸附柱置于2～8℃可保存更長時間，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可穩(wěn)定保存6個月。 Buffer P1在使用前先加入RNase A（將試劑盒中提供的RNase A全部加入），混勻，置于2～8℃保存。使用前需在室溫中放置一段時間，恢復(fù)至室溫后使用。 次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。 使用前請先檢查Buffer P2和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀，如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。 注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物質(zhì)，請戴手套操作，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。 使用Buffer PS處理過的吸附柱好立即使用，避免放置時間過長影響使用效果。 提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。 操作步驟： 取150mL過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管（自備）中，12000×g離心2～3分鐘收集細(xì)菌，盡量吸棄全部上清。 向留有菌體沉淀的離心管中加入12mL Buffer P1（請先檢查是否已加入RNase A） 使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮細(xì)菌沉淀。 注意：如果菌塊未*混勻，將會影響裂解效果，使提取量和純度偏低。 向離心管中加入12mL Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻8～10次，使菌體充分裂解，室溫放置3～5分鐘。此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠。 注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不*，應(yīng)減少菌體量。 向離心管中加入12mL Buffer E3，立即上下顛倒混勻8～10次，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀，室溫放置5分鐘。12000×g離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至干凈離心管（自備）中，注意不要帶入沉淀。 注意：Buffer E3加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。 加入0.3倍濾液體積的異丙醇，上下顛倒混勻。 注意：加入異丙醇過多容易導(dǎo)致RNA污染。 柱平衡：向已裝入收集管中的吸附柱DQ中加入2mL Buffer PS，12000×g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 將步驟5中液體與異丙醇的混合溶液轉(zhuǎn)移到平衡好的吸附柱DQ（已裝入收集管）中。12000×g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：吸附柱的大容積為15mL，所以第7步中所得溶液分多次過柱。如果離心機(jī)轉(zhuǎn)子傾角較大時，建議加入吸附柱的溶液體積不過10mL，以防發(fā)生漏液現(xiàn)象。 向吸附柱中加入10mL Buffer PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12000×g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。 重復(fù)步驟8。 向吸附柱中加入10mL Endo-Free Buffer PW，12000×g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 將吸附柱重新放回收集管中，12000×g離心5分鐘，倒掉廢液，將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，以*晾干吸附柱中殘余的漂洗液。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。 將吸附柱置于一個新的離心管中，向吸附膜的中間部位加入1～3mL Endo-Free Buffer EB，室溫放置2～5分鐘，12000×g離心5分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質(zhì)粒。 注意： 1）為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2～5分鐘，12000×g離心5分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。 2）質(zhì)粒拷貝數(shù)較低或>10kb時，Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預(yù)熱，可以增加提取效率。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標(biāo)注。
將二級容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
真菌聚甲基半乳糖醛酸酶（Polymethylgalacturonase；PMG）活性比色法定量檢測試劑盒
植物聚甲基半乳糖醛酸酶（Polymethylgalacturonase；PMG）活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量檢測試劑盒
組織胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)菌胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量檢測試劑盒
兔白介素-8(rabbit IL-8) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Benzyloxyindole 20289-26-3 中文名：4-芐氧基吲哚 分子式：C15H13NO
兔白介素-6(rabbit IL-6) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Benzyloxyindole 20289-26-3 中文名：4-芐氧基吲哚 分子式：C15H13NO 度：98.0%
兔白介素6(IL-6)elisa 4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate 3479-47-8 中文名：N-芐氧羰基-L-天冬-4-芐脂 分子式：C19H19NO6 度：98.0%
兔白介素-2(rabbit IL-2) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Benzyl L-aspartate 中文名：L-天冬-4-芐酯 分子式：C11H13NO4
兔白介素-1β(rabbit IL-1β) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate 7536-58-5 中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬-4-芐酯 分子式：C16H21NO6
無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒（100～300mL）(1:4500) Pancreatin 質(zhì)量規(guī)格：酶活1:4500,BR MouseThioredoxin,xelisa小鼠硫氧化還原蛋白(x)elisa規(guī)格：96T/48T
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君 Orphenadrine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa ，英文名： ACA-IgM ELISA Kit
β-半乳糖苷酶 β-Galactosidase 質(zhì)量規(guī)格：700u/mg，羅氏分裝 大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA檢測試劑盒RatMyoglobin,MYO/MBELISAKit 96T/48T
脫落酸 Abscisic acid,S-ABA 質(zhì)量規(guī)格：98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu)酶)NIMA結(jié)合1(PIN1)試劑盒 Human PIN1 ELISA Kit
脫落酸(高) Abscisic acid,S-ABA 質(zhì)量規(guī)格：98%,BR Ratplaceagrowthfactor,PLGFELISAKit大鼠胎盤生長因子(PLGF)elisa規(guī)格：96T/48T
脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈 Abscisic acid,S-ABA 質(zhì)量規(guī)格：95%,BR GSK-3BETA蛋白共沉淀分析試劑盒5
(1:3000) PEPSIN 質(zhì)量規(guī)格：1:3000,BR Mousethrombieceptor,elisa小鼠受體()elisa規(guī)格：96T/48T
核糖核酸酶A(sigma) Ribonuclease A from bovine pancreas 質(zhì)量規(guī)格：≥50 U/mg,sigma 原裝 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)elisa ，英文名： ACA-IgG ELISA Kit
S-4 Andarine 質(zhì)量規(guī)格：>98% 大鼠B6(VB6)ELISA檢測試劑盒RatVitaminB6,VB6ELISAKit 96T/48T
(1:12000) PEPSIN 質(zhì)量規(guī)格：1:12000,BR 人蛋白 DJ-1(PARK7)試劑盒 Human Protein DJ-1,PARK7 ELISA kit
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
