產品名稱：人*結合蛋白(RBP)ELISA  試劑盒

：135 64515386    

產品規格：48T/96T

ELISA試劑盒說明書

Elisa試驗在實驗室中比較常見，那么elisa實驗具體步驟怎么做，有沒有比較詳細的elisa試劑盒說明書呢？

  Elisa試劑盒說明書如下：

  ELISA試劑盒說明書1:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 

  1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10靏／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

  2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

  3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

  4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。   5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。   ELISA試劑盒說明書二：用于檢測未知抗體的間接法：

  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10靏／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。   2.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

  3.于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

  4.于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘   5.于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 

  6.可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

  ELISA 是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優點，已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域

人*結合蛋白(RBP)ELISA  試劑盒間接法簡單操作步驟：

　　（1）、將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原；

　　（2）、加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗-體復合物；

　　（3）、加酶標抗抗體；

　　（4）、加入酶促反應底物，發生顯色反應，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

ELISA試劑盒操作技術相關的注意事項：

•  (FAS/CD95)ELISA試劑盒說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

　　⑵ 加樣后及時放人孵箱。標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

　　(3)封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發，產生周邊現象從而導致“花板”的出現。

　　(4)用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。

　　(5)合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。

　　(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

　　(7)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。

　　(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產生氣泡。

    (9)應保證C清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結果。

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