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細胞名稱 人B淋巴細胞母細胞;NTCC721.221
形態特性 圓形
生長特性 懸浮生長
特征特性
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法
傳代情況
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X,X;CSF1PO:11,12;D12S391:20,24;D13S317:11,12;D16S539:12,12;D18S51:12,13;D19S433:12,14;D21S11:28,28;D2S1338:19,24;D3S1358:14,16;D5S818:12,12;D6S1043:11,14;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:23,23;Penta E:5,12;TH01:9.3,9.3;TPOX:8,12;vWA:14,17;
同工酶
染色體
使用權限 B類
培養需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環境:首先應保證被培養的細胞處于無菌、無毒的環境,即對培養液和所有的培養用具進行無菌處理。通常還要在培養液中添加一定量的抗生素以防培養過程中的污染。
2、營養物質:細胞體外培養所需營養物質與體內基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細胞體外培養的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數細胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環境:培養所需氣體主要有O2和CO2,O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養液的pH。進行細胞培養時,通常采用培養皿或松蓋培養瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養箱中進行培養。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Myc標簽
ACVR2A cDNA Mouse 小鼠 ACVR2A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
LIFR cDNA Mouse 小鼠 LIFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
ACVR2B cDNA Mouse 小鼠 ACVR2B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
FCGR1 cDNA Mouse 小鼠 CD64 / FCGR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
PLBD2 cDNA Human 人 PLBD2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
LIPG cDNA Human 人 LIPG 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
HDAC10 cDNA Human 人 HDAC10 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
NTN4 cDNA Human 人 NTN4 / Netrin-4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
CD244 cDNA Human 人 2B4 / CD244 / SLAMF4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
FZD5 cDNA Mouse 小鼠 FZD5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
PARP1 cDNA Mouse 小鼠 PARP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
NRP1 cDNA Mouse 小鼠 Neuropilin-1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
IL6ST cDNA Mouse 小鼠 IL6ST 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
MSLN cDNA Human 人 MSLN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TNFSF11 cDNA Human 人 TNFSF11 / CD254 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 帶FLAG標簽
GPNMB cDNA Human 人 GPNMB 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
LRPAP1 cDNA Human 人 LRPAP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
IL2RB cDNA Human 人 IL2Rb / CD122 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
PDGFRB cDNA Human 人 CD140b / PDGFRb 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
ERBB3 cDNA Human 人 ErbB3 / HER3 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
GPC3 cDNA Human 人 glypican 3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CD274 cDNA Human 人 CD274 / B7-H1 / PD-L1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽