實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>
本試劑盒用于測(cè)定血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶visfatin 大鼠內(nèi)脂素的含量。
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | visfatin 大鼠內(nèi)脂素elisa試劑盒 | 英文名稱 | visfatin ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5623E | 規(guī)格 | 48T/96T |
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中visfatin 大鼠內(nèi)脂素。用純化的visfatin 大鼠內(nèi)脂素抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加visfatin 大鼠內(nèi)脂素，再與 HRP 標(biāo)記的visfatin 大鼠內(nèi)脂素抗體結(jié)合，形成抗體抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的visfatin 大鼠內(nèi)脂素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中visfatin 大鼠內(nèi)脂素濃度。
檢測(cè)原理：
1. 抗原-抗體反應(yīng)
ELISA的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。抗原是一種能夠與抗體結(jié)合的物質(zhì)，而抗體則是免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，能夠識(shí)別并結(jié)合抗原。抗原-抗體結(jié)合是高度特異的，因此ELISA能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)樣本中的抗原或抗體。
2. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
visfatin 大鼠內(nèi)脂素elisa試劑盒在ELISA中，抗原或抗體被吸附在固相載體表面。常用的固相載體包括聚苯乙烯、尼龍等。載體表面經(jīng)過特殊處理，可以增強(qiáng)其與抗原或抗體的結(jié)合能力。將酶標(biāo)記的二抗加入反應(yīng)體系中，二抗能夠與抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原-抗體復(fù)合物。
3. 底物顯色反應(yīng)
在加入底物后，酶標(biāo)抗原-抗體復(fù)合物與底物發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。底物可以是顯色劑，也可以是熒光染料。顯色反應(yīng)的強(qiáng)度與抗原-抗體復(fù)合物的量成正比，因此可以通過測(cè)量光密度值來定量分析樣本中的抗原或抗體。
4. 終止反應(yīng)
顯色反應(yīng)持續(xù)一定時(shí)間后，需要加入終止液終止反應(yīng)。終止液可以使酶失活，停止顯色反應(yīng)。終止液一般是酸或堿溶液。
5. 檢測(cè)與分析
終止反應(yīng)后，將固相載體放入多功能酶標(biāo)儀中測(cè)量各孔的光密度值。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可以得出樣本中抗原或抗體的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過檢測(cè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制而成的。
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注意事項(xiàng)：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
