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產(chǎn)品名稱：IMR-32細(xì)胞，人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法

細(xì)胞特性

組織來(lái)源：神經(jīng)母細(xì)胞瘤，大腦
培養(yǎng)條件：MEM +10% FBS
形 態(tài)：貼壁；神經(jīng)母細(xì)胞，成纖維細(xì)胞
背 景：存在兩種細(xì)胞類型，小的神經(jīng)母細(xì)胞樣細(xì)胞和大的透明成纖維樣細(xì)胞。該細(xì)胞是1967年4月由Nichols WW, Lee J和Dwight S建立，來(lái)源于一名13月齡白人男嬰腹部腫塊，臨床診斷為神經(jīng)母細(xì)胞瘤，伴有極少部位的類器官樣分化。 

含量：>1x10的6次方 個(gè)/mL
污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性：
描述：（1）所有細(xì)胞株購(gòu)自ATCC；
（2） 公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；
（3） 細(xì)胞株數(shù)量約 1000000個(gè)/瓶；
（4） 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

密度超過(guò)90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代，提供復(fù)蘇好的細(xì)胞株，貼壁及懸浮細(xì)胞形式，細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細(xì)胞報(bào)價(jià)、所需培養(yǎng)基、種屬來(lái)源、組織來(lái)源、形態(tài)、背景資料等。

細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：
1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。
2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的*無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。
3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。
5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。
 
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
                       

IMR-32細(xì)胞，人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法復(fù)蘇方法

1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。

3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺(tái)上打開蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

 我公司認(rèn)為購(gòu)買細(xì)胞的客戶有培養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，客戶收到細(xì)胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時(shí)，我們要求客戶留一瓶細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細(xì)胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的細(xì)胞問(wèn)題。
 

來(lái)源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個(gè)，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運(yùn)輸方式：活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）。
細(xì)胞純度：95%。
細(xì)胞來(lái)源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說(shuō)明書。

用途：本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
１．將細(xì)胞消化下來(lái)，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時(shí)后．再放入－８０度冰箱過(guò)夜，第二天放入液氮罐保存.

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問(wèn)題一：細(xì)胞長(zhǎng)得很快很好，30萬(wàn)一瓶，3天就長(zhǎng)滿，也沒(méi)出現(xiàn)污染，死細(xì)胞也較少。但是消化細(xì)胞后，用培養(yǎng)基中和消化液，在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上可以看見細(xì)胞粘成一小團(tuán)團(tuán)的，無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，很影響種板的準(zhǔn)確性，但傳代后細(xì)胞鋪板均勻，生長(zhǎng)得也很好。我嘗試了很多次細(xì)胞計(jì)數(shù)，每次都出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)的問(wèn)題。

問(wèn)題解答1：遇到這種情況，辦法有兩個(gè)，1.就是不能等到細(xì)胞長(zhǎng)得很滿時(shí)才去消化計(jì)數(shù)，可以在密度有90%時(shí)就去計(jì)數(shù)，如果怕細(xì)胞量不夠鋪板可以兩瓶甚至三瓶合在一起。2.如果聚團(tuán)還是很嚴(yán)重，我就把一個(gè)細(xì)胞團(tuán)默認(rèn)為3-4個(gè)細(xì)胞這樣來(lái)計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)這樣計(jì)數(shù)跟實(shí)際細(xì)胞數(shù)也沒(méi)有太大出入，之后我就一直這樣做了。我查了很多資料，都說(shuō)這個(gè)細(xì)胞容易抱團(tuán)生長(zhǎng)，因?yàn)橛型挥|，所以容易連在一起，為了避免過(guò)度消化以及吹打。

問(wèn)題解答2：針對(duì)你說(shuō)的抱團(tuán)情況，我的處理方法，就是用PBS輕輕吹洗細(xì)胞，目的是把貼壁不好的細(xì)胞棄掉，你這樣重復(fù)幾次后細(xì)胞狀態(tài)就能恢復(fù)了，還是強(qiáng)調(diào)一下，就是消化是不能消化過(guò)度，吹打時(shí)也要輕柔。另外血清濃度不要太高，這樣容易導(dǎo)致細(xì)胞加速老化，一般10%就可以了。 

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

傳代時(shí)間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3  1:1~1:2

細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)安全性：所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

SSP-25 肝膽管癌細(xì)胞 SSP-25
SV40 MES 13 小鼠腎小球系膜細(xì)胞 SV40 MES 13
SV-HUC-1 膀胱上皮永生化細(xì)胞 SV-HUC-1
SW 1353 細(xì)胞， 骨肉瘤細(xì)胞 SW 1353 細(xì)胞
SW1116細(xì)胞， 結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116細(xì)胞
SW-13 細(xì)胞， 腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 SW-13 細(xì)胞
SW480 [SW-480] 細(xì)胞， 結(jié)腸癌細(xì)胞 SW480 [SW-480] 細(xì)胞
甲狀腺鱗癌細(xì)胞 SW579 [SW 579; SW-579] 細(xì)胞
SW620 細(xì)胞， 結(jié)腸癌細(xì)胞 SW620 細(xì)胞
T24 細(xì)胞， 膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 T24 細(xì)胞
T-47D 細(xì)胞， 乳xian管癌細(xì)胞 T-47D 細(xì)胞
Tca-8113 細(xì)胞， 舌鱗癌細(xì)胞 Tca-8113 細(xì)胞
TE-1 細(xì)胞， 食管癌細(xì)胞 TE-1 細(xì)胞
TE-10 細(xì)胞， 食管癌細(xì)胞 TE-10 細(xì)胞
TE-11 細(xì)胞， 食管癌細(xì)胞 TE-11 細(xì)胞
THP-1 細(xì)胞， 單核細(xì)胞白血病 THP-1 細(xì)胞
TM3細(xì)胞， 小鼠睪wan間質(zhì)細(xì)胞 TM3細(xì)胞
TT 細(xì)胞， 甲狀腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 TT 細(xì)胞
U-2 OS 細(xì)胞， 骨肉瘤細(xì)胞 U-2 OS 細(xì)胞
U251 細(xì)胞， 膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251 細(xì)胞
U-87 MG 細(xì)胞， 腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U-87 MG 細(xì)胞
U-937 細(xì)胞， 組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 U-937 細(xì)胞
V79 細(xì)胞， 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 V79 細(xì)胞
Vero 細(xì)胞， 非洲綠猴腎細(xì)胞 Vero 細(xì)胞
VERO C1008 (E6) 細(xì)胞， 非洲綠猴腎細(xì)胞 VERO C1008 (E6) 細(xì)胞