上海研盟生物科技有限公司Anti-Patched抗體,Patched/PTCH抗體*,主要應用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細胞術等實驗中。說明書隨貨發送,您也可以直接我司在線客服索取。客服
中文名稱:Patched/PTCH抗體
英文名稱:Anti-Patched抗體
產品編號:BYK-1614R
保存條件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
此產品本公司有標記的一抗出售,相關標記有:Alexa Fluor 350 標記、Alexa Fluor 488 標記、Alexa Fluor 555 標記、Alexa Fluor 647 標記、AP標記、APC標記、Biotin標記、Cy3標記、Cy5標記、Cy5.5標記、Cy7標記、FITC標記、Gold標記、HRP標記、PE標記、PE-Cy3標記、PE-CY5標記、PE-CY5.5標記、PE-CY7標記、RBITC標記
規格:0.1ml/0.2ml
濃度:1mg/1ml
抗體來源:本公司抗體有兔來源和鼠來源等
克隆類型:兔來源為多抗,鼠來源為單抗
產品類型:一抗
別名:Protein patched homolog 1; PTCH; PTC1; A230106A15Rik; BCNS; FLJ26746; FLJ42602; Holoprosencephaly 7; HPE7; mes; NBCCS; OTTHUMP00000021709; OTTHUMP00000021710; Patched; Patched (Drosophila) homolog; Patched 1; Patched homolog (Drosophila); Patched homolog 1 (Drosophila); Patched homolog 1; Patched protein homolog 1; PTC; PTC1; PTCH; PTCH protein +12b; PTCH protein +4'; PTCH protein -10; PTCH protein; PTCH1; PTCH1 protein; PTCH11; Ptch2; ; Patched / PTCH; PTC1_HUMAN.
Anti-Patched抗體,Patched/PTCH抗體產品介紹:PTCH (Patched protein homolog 1) is a receptor for sonic hedgehog (SHH), indian hedgehog (IHH) and desert hedgehog (DHH). PTCH associates with the smoothened protein (SMO) to transduce the hedgehog's proteins signal.PTCH has a tumor suppressor function, as inactivation of this protein is probably a necessary, if not sufficient step for tumorigenesis. PTCH is expressed in the adult brain, lung, liver, heart, placenta, skeletal muscle, pancreas and kidney. It is also expressed in tumor cells but not in normal skin. During development PTCH is found in all major target tissues of sonic hedgehog, such as the ventral neural tube, somites, and tissues surrounding the zone of polarizing activity of the limb bud.
Defects in PTCH are probably the cause of basal cell nevus syndrome also known as Gorlin syndrome or Gorlin-Goltz syndrome.
免疫組化操作流程
(一) 儀器設備
1. 18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或用微波爐.
2. 水浴鍋
(二) 試 劑
1. PBS緩沖液(ph7.2―7.4):NaC137mmol/L,KCl 2.7mmol/L ,Na2HPO4 4.3mmol/L,
KH2PO4 1.4mmol/L.
2.0.01mol/L檸檬酸鈉緩沖液(CB,ph6.0,1000ml):檸檬酸三鈉3g,檸檬酸0.4g。
3.0.5mol/L EDTA緩沖液(ph8.0):700ml水中溶解186.1g EDTA&
8226;2H2O,用10mmol/L
NaOH調至ph8.0,加水至1000ml.
4. 1mol/L的TBS緩沖液(ph8.0):在800ml水中溶解121gTris堿,用1N的HCl調至ph8.0,加水1000ml。
5. 酶消化液:a. 0.1%*:用0.1%CaCl 12(ph7.8)配制。b.0.4%*液:用0.1N的HCl配制。
6. 3%甲醇―H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制
7. 風裱劑:a. 甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液(ph9.0–9.5)等量混合
b 油和TBS(PBS)配制
8.TBS/PBS PH9.0–9.5,適用于熒光纖維鏡標本;ph7.0-7.4適合光學纖維標本。
(三) 操作流程
1 脫蠟和水化:脫蠟前應將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。 a 組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯后在浸泡10分鐘
b 無水乙醇中浸泡五分鐘
c 95%乙醇中浸泡五分鐘
d 75%乙醇中浸泡五分鐘
2 抗原修復:用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片:
A 抗原熱修復
a 高壓熱修復 在沸水中加入EDTA(ph8.0)或0.01m*緩沖溶液(ph6.0).蓋上不銹鋼鍋蓋,但不能鎖定。將玻片置于金屬染色加上,緩慢加壓,是玻片在緩沖液中浸泡五分鐘,然后將蓋子鎖定,小閥門將會升起來。10分鐘后除去熱源,置入涼水中,當小閥門沉下去后打開蓋子。此方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復。
b 沸熱修復 電爐或水浴鍋加熱0.01*緩沖液(ph6.0)至95℃左右,放入組織芯片加熱10-15分鐘。
C 微波爐加熱 在微波爐里加熱0.01*緩沖液(ph6.0)至沸騰后將組織芯片放入,斷電,間隔5-10分鐘,反復1-2次。適用的抗原:
Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.
ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等
B 酶消化方法
常用0.1%*和0.4%*液。*使用前預熱37℃,消化時間約為5-30分鐘。適用于被固定遮蔽的抗原:包括 Collagen.GFAP.
Complement.Cytokeratin.C-erB-2.LCA.LN.等
3 免疫組化染色
SP法
(1) 脫蠟、水化 (2)PBS洗2-3次各5分鐘 (3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在
TMA上,室溫靜置10分鐘 (4)PBS洗2-3次各5分鐘 (5)抗原修復
(6)PBS洗2-3次各5分鐘 (7)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘,甩去多余液體(8)滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時或4℃過夜或37℃1小時(9)4℃過夜后需在37℃復溫45分鐘(10)PBS洗3次每次2分鐘
(11)滴加Ⅱ抗45-50μl,室溫靜置或37℃1小時(12)Ⅱ抗中可加入0.05%的
tween-20.(13)PBS洗3次各5分鐘(14)DAB顯色5-10分鐘,在顯微鏡下掌握染色程度 (15)PBS或自來水沖洗10分鐘 (16)蘇木精復染2分鐘,鹽酸酒精分化(17)自來水沖洗10-15分鐘 (18)脫水、透明、封片、鏡檢。
SABC法
(1) 脫蠟、水化 (2)PBS洗2次各5分鐘 (3)用蒸餾水或PBS配制新鮮的3%H2O2,室溫封閉5-10分鐘,用蒸餾水洗3次(4)抗原修復
(5) PBS洗5分鐘 (6)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘,甩去多余液體(7)滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時或4℃過夜或37℃1小時
(8)PBS洗3次各2分鐘(9)滴加*化Ⅱ抗,20℃-37℃ 20分鐘
(10)PBS洗3次各2分鐘 (11)滴加試劑SABC 20℃-30℃ 20分鐘
(12) PBS洗4次各5分鐘 (13) DAB顯色:試劑盒或自配顯色劑顯色
(14)脫水、透明、封片、鏡檢。
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