細(xì)胞系說明書
細(xì)胞名稱：L6565 小鼠白血病克隆細(xì)胞系
培養(yǎng)條件：RPMI-1640+10% FBS
形 態(tài)：懸浮；淋巴母細(xì)胞樣
背 景：L6565細(xì)胞源自L6565白血病小鼠的脾細(xì)胞胰懸液。染色體數(shù)從38到144不等。電鏡觀察證明L6565克隆細(xì)胞核邊界清晰，細(xì)胞質(zhì)中oragnalles和A類C類病毒顆粒豐富。 c-myc和c-fos過量表達(dá)。 L6565細(xì)胞克隆是一株含youRNA病毒的淋巴細(xì)胞白血病干細(xì)胞。
細(xì)胞系說明書
L6565(小鼠白血病克隆細(xì)胞系)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分列指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分列相數(shù)／100個細(xì)胞。一般細(xì)胞分列指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分列增殖旺盛，是活力時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進(jìn)行各種試驗。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活L6565(小鼠白血病克隆細(xì)胞系)數(shù)目成正比（死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細(xì)胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.L6565(小鼠白血病克隆細(xì)胞系)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間）。
3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制L6565(小鼠白血病克隆細(xì)胞系)生長曲線。
