細(xì)胞處理：
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
商品屬性
鑒定 | STR鑒定正確 | 種屬 | 人 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 分類 | 人細(xì)胞系 |
商品介紹
細(xì)胞別稱：COLO320 HSR ；人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
種屬來(lái)源：人
年齡性別：33歲，男
組織來(lái)源：結(jié)直腸
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介：該細(xì)胞1984年建系，源自一位33歲患有大腸腺癌男性經(jīng)5-fu治療后的腹水。
生物安全等級(jí)：
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無(wú)
基因表達(dá)情況：
保藏機(jī)構(gòu)：
培養(yǎng)基：90%DMEM+10% FBS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠白介素12(IL-12/P40)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： IL-12/P40 ELISA Kit
Mouse pyruvate dehydrogenase E1 (PDH E1) ELISA Kit 小鼠酸脫氫酶E1(PDH E1)檢測(cè)試劑盒
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CLIAKitforIL-28(humanIerleukin28)ELISAKit人白介素28
通用型酵母樣品細(xì)胞周期G1/S和G2/M期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
PDGFsR-α大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α
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白介素1受體Ⅱ(IL1R2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 1 Receptor Type II (IL1R2)
PLEK重組人 Pleckstrin / PLEK / p47 蛋白 Protein
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CD274 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
白介素1受體Ⅱ(IL1R2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 1 Receptor Type II (IL1R2)
CSTA Protein Human 重組人 Cystatin A / CSTA 蛋白
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CD274 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
PLEK重組人 Pleckstrin / PLEK / p47 蛋白 Protein
COLO320 HSR人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞小鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒 96T/48T
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Humanheafattyacidbindingprotein,h-FABPELISAKit 人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8檢測(cè)試劑盒人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
正常男性人體肝組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升
Mouseai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠apelin12(AP12)ELISAKit ELISA. 96T/48T
