whiov-P24C-MoAb細胞,雜交瘤細胞必須生活在等滲環境中,大多數培養細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數哺乳動物細胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜。
產品名稱:whiov-P24C-MoAb細胞,雜交瘤細胞
培養條件:DMEM+15%FBS+1%P/S
庫存狀態:現貨供應
2-3代培養好的:款到后需要培養7-15個工作日
P1代干冰運輸:款到后需要準備三天左右
細胞培養室有24h的空氣消毒裝置,但我們還是做的很細,水盤里加的是滅菌水,每次開相時都時酒精擦手。當然,進室之前洗手是肯定的。每星期消毒水擦遍每一個角落。我們一直很安全。現在我已經在里面做了5、6次原代取材,也沒污染過。總之,細胞培養是個很細致的事,時時小心,問題應該不大。
實驗步驟貼壁細胞:
1.收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調密度至1000-10000孔,(邊緣孔用無菌PBS填充)。
2.5%CO2,37℃孵育,至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上,細胞貼壁后即可加藥,或兩小時,或半天時間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午加藥.一般5-7個梯度,每孔100ul,設3-5個復孔.建議設5個,否則難以反應真實情況
3.5%CO2,37℃孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。
4.每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),繼續培養4h。若藥物與MTT能夠反應,可先離心后棄去培養液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養液。
5.終止培養,小心吸去孔內培養液。
6.每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
7.同時設置調零孔(培養基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜)。
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