現貨供應:HCCLM3 細胞,人高轉移肝癌細胞價格產品經無數次市場驗證,若出現質量問題(非人為的)可無條件換貨或退貨,詳細信息:
規格:70%密度的25cm2培養瓶的細胞一瓶
特點:細胞代數為4-5代左右
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
收到“HCCLM3 細胞,人高轉移肝癌細胞價格”后應如何去正確的處理:
您需要準備好細胞所要用到的培養基和相關試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導致對細胞處理不當,或者環境的不適應而造成細胞的死亡。
1) 收到細胞,*時間要鏡檢:觀察細胞形態是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度,有疑議及時咨詢提供細胞的技術人員。由于運輸的 時間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養基的瓶子里生長的狀態和平時會有點不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的 培養基瓶子里面,會發生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以*的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。
2) 當通過上一步的觀察,細胞初步沒有任何問題時,進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養基,僅保留5到10mL 培養所需的常規培養基;或更換新鮮的培養基,置于培養箱中,隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,會調整為靜止期,或者慢速生*,必須恢復37 度的環境至少3個小時左右,才能重新調整到接近對數生*的狀態,在對數生*進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。
3)如果經*步觀察發現“”密度超過90%,并且細胞狀態很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態穩定,不易受外界影響的細胞 可 以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態容易波動的細胞類型,一次少傳些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩定生長。至于一些比較陌生的細胞,*次 處理也可以依照第二種情況。
售后:收到細胞后7天,如發現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時傳真或致銷售人員,我們將盡快為您解決。
操作方法
固定 | 培養細胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進行脫蠟、水化。 |
洗滌 | 玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。 |
反應 | 洗滌后的玻片用吸水紙吸干細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應液(每50μL反應液含TdT酶0.5μL,標記的-dUTP 1μL),使反應液均勻地覆蓋于所有細胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。 |
終止反應 | 去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內,洗滌兩次,每次5min。 |
FITC標記 | 洗滌后的玻片用吸水紙吸去細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應液(含FITC 2.5μg/mL),室溫下避光孵育10min。 |
洗滌 | 將玻片置于洗滌緩沖液內,洗兩次,每次5min。 |
PI復染 | 將玻片置于盛有PI染液的染色缸內,室溫下避光染色30min。 |
封片 | 用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。 |
交貨時間 | 10~15天 |
客戶須知(對材料的要求、注意事項)
結果提供:正常和陽性對照玻片及其1張數碼照片,剩余石蠟塊,檢測報告;
樣本要求:取材保持組織新鮮(組織塊以小于2cm×1.5cm×0.3cm為宜),立即放入固定液中(固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液,體積為組織塊的10倍以上),避免干燥;對于有血跡的樣本,可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中;經固定后的樣本必須在48小時內處理。
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