優質的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。
雞脂蛋白脂酶(LPL)檢測試劑盒技術參考實驗-標本的采取和保存
可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液、分泌物和排泄物)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
雞脂蛋白脂酶(LPL)檢測試劑盒技術參考實驗-標本的采取和保存
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELISA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
雞脂蛋白脂酶(LPL)檢測試劑盒技術參考實驗要點,洗滌:洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內反應液;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;d.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。
雞脂蛋白脂酶(LPL)檢測試劑盒技術參考相關產品展示:hz-3492E 豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3493E 豬白介素1α(IL-1α)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3494E 豬促胃液素受體(GsaR)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3495E 豬生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3496E 豬地塞米松(Dex)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3497E 豬D二聚體(D2D)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3498E 豬髓過氧化物酶(MPO)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3499E 豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3500E 豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3501E 豬黑色素瘤轉移表面黏附分子(MMSAM)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3502E 豬可溶性血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3503E 豬血管內皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3504E 豬去甲腎上腺素(NE)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3505E 豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3506E 豬凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3507E 豬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3508E 豬Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3509E 豬氫化可的松(HYD)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3510E 豬一氧化氮(NO)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3511E 豬內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3512E 豬內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3513E 豬血管生成素2(ANG-2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3514E 豬血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3515E 豬血管生成素1(ANG-1)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3516E 豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3517E 豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3518E 豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3519E 豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3520E 豬熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3521E 豬C反應蛋白(CRP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3522E 豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3523E 豬主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3524E 豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3525E 豬白介素17(IL-17)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3526E 豬髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3527E 豬生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3528E 豬α干擾素(IFN-α)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3529E 豬磷酸化細胞外信號調節激酶(pERK)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3530E 豬乙酰膽堿(ACh)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3531E 豬主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3532E 豬肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3533E 豬雌二醇受體(ER)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3534E 豬補體蛋白3(C3)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3535E 豬骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA kit 血清/組織/尿液