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Ex?(nm)	337	Em?(nm)	495

人血清白蛋白（HSA）是人血漿中酸性藥物的重要載體之一，并且已表現(xiàn)出可逆地結(jié)合大量不同的化合物。已為HSA確定了幾個(gè)不同的配體結(jié)合位點(diǎn)。其中，Site II被確定為主要的藥物結(jié)合位點(diǎn)之一。人血清白蛋白（HSA）Site II結(jié)合測(cè)定試劑盒是一種基于熒光的高通量測(cè)定法，用于確定小分子與HSA的結(jié)合。該測(cè)定法基于新型熒光探針HSA Blue™S2。它的特征是具有特別的光譜和結(jié)合特性，可結(jié)合至HSA的位點(diǎn)2。HSA Blue™S2在蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)和蛋白質(zhì)未結(jié)合狀態(tài)之間顯示出較大的熒光強(qiáng)度差異。在HSA Blue™S2存在下，小分子競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合HSA導(dǎo)致熒光強(qiáng)度低。該測(cè)定法可用作高通量篩選工具，以確定在II位點(diǎn)與HSA的總結(jié)合。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的人血清白蛋白（HSA）Site II結(jié)合測(cè)定試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品分析方案

概述

向孔中添加HSA工作溶液（50 µL）和HSA Blue™S2工作溶液（50 µL）

向各個(gè)孔中添加各種濃度的測(cè)試藥物（50 µL）

在室溫下孵育15至45分鐘

使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 365/480 nm（截止= 435 nm）下測(cè)量響應(yīng)

儲(chǔ)備溶液配制

HSA Blue™S2儲(chǔ)備溶液

將100 µL DMSO（組分D）加入HSA Blue™S2（組分A）中并充分混合。
注意：將未使用的HSA Blue™S2儲(chǔ)備溶液分裝成一小份保存在-20°C下，以避免凍融循環(huán)。

工作溶液配制

1. HSA Blue™S2工作溶液

將50 µL HSA Blue™S2儲(chǔ)備溶液添加到5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中并充分混合。
注意：HSA Blue™S2工作溶液不應(yīng)儲(chǔ)存，應(yīng)立即使用。
注意：5 mL HSA Blue™S2工作溶液足以用于一塊96孔板。

2. HSA工作溶液

將250 µL HSA溶液（組分C）加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中并充分混合。
注意：5 mL HSA工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。

3.試藥工作液

使用HSA分析緩沖液（組分B）將藥物原液在3X工作溶液中稀釋至所需濃度。
注意：對(duì)于此處提到的方案，一孔的建議體積為50 µL。

操作步驟

以下協(xié)議可用作指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化。

在孔中加入50 µL HSA Blue™S2工作溶液。
在孔中加入50 µL HSA工作溶液。
在各自的孔中加入50 µL藥物工作溶液。（總體積= 150 µL /孔）。
將樣品在室溫下孵育30分鐘。
使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 365/480 nm（截止= 435 nm）處檢測(cè)熒光的增加。

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