樣品實驗方案

1.準備線粒體染色溶液：

1.1將MitoLite 染料加熱至室溫。

1.2通過將20 µL的500 X Mitolite 染料稀釋到10 mL的Hanks和20 mm Hepes緩沖液或您選擇的緩沖液（HBSS）中來制備染料工作液。

注1：20 µL Mitolite 染料足以用于一塊96孔板。 分裝并在<-15℃下存儲未使用的MitoLite 染料原液。 避免光照，并避免重復的凍融循環。

注2：熒光線粒體指示劑的濃度因具體應用而異。 可以根據特定的細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來改變染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于貼壁細胞：a）在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上生長細胞。 當細胞達到所需的匯合度時，添加等體積的染料工作溶液（來自步驟1.2）。 b）將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。 C）更換染料加載溶液，或用預熱的（37°C）漢克斯和20 mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液（例如，含有1：1濃度的生長培養基的緩沖液）洗滌細胞（尤其對于cat＃22679） ）。用HBSS或生長培養基填充細胞孔。 d）。使用裝有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：建議增加標記濃度或孵育時間，以使染料在細胞未充分染色的情況下積累。

2.2對于懸浮細胞：以1000 rpm離心細胞5分鐘，以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱的（37°C）生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料工作溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。更換染料加載溶液或用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如具有1：1濃度的生長培養基的緩沖液）洗滌細胞（特別是對于cat＃22679）。用HBSS或生長培養基填充細胞孔。使用裝有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：建議增加標記濃度或孵育時間，以使染料在細胞似乎未充分染色的情況下積累。

注2：懸浮細胞可以附著在已經用BDCell-Tak®（BD Biosciences）處理過并被染色為貼壁細胞的蓋玻片上（參見步驟2.1）。