樣品分析

1.準備線粒體染色溶液：

1.1將所有組件溫度調至室溫。

1.2通過將20μLMitolite Red（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μL的500X Mitolite Red（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Red。避光，避免反復凍融循環。

注2：熒光線粒體指示劑的濃度根據具體應用而變化?？梢愿鶕囟毎愋秃图毎蚪M織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。