上海邦景實業(yè)有限公司
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更新時間:2023-09-17 09:30:26瀏覽次數(shù):309
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱:大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞
貨號:BJ-X97717
規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類:原代細胞
商品介紹:
名稱 大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標本中,少突膠質(zhì)細胞比星狀膠質(zhì)細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質(zhì)細胞或寡突膠質(zhì)細胞。少突膠質(zhì)細胞(oligodendrocyte)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細胞,其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細胞祖細胞、前少突膠質(zhì)細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細胞等階段。有學者將少突膠質(zhì)細胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是,細胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程,其形態(tài)、表達產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴格的界限,因此,其分類是相對的。這三型分別為:Ⅰ型少突膠質(zhì)細胞又稱前O2A(pre-O2A progenitor cell)。細胞呈圓形,表面光滑,直徑約3μm,體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質(zhì)表面,具有很的分裂增殖潛力,表達GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細胞胞體常有雙極或三極突起,極少數(shù)為單極突起,直徑約7μm,有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時為雙潛能細胞,既可分化為少突膠質(zhì)細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),故又稱為少突膠質(zhì)細胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,O2A)。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ(淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體),故常用A2B5抗體標記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細胞不再具有分裂增殖能力,為分裂終期細胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細胞。不成熟的OL胞體常伸出4~5條較粗大突起,表面還殘留有A2B5標記物,同時也表達O1-O4抗原,無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細胞突起有如蜘蛛網(wǎng),大量表達半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,GC)、蛋白脂蛋白(proteio lipid protein,PLP)、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)等,有對軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細胞前體細胞(簡稱少突膠質(zhì)細胞前體細胞)包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細胞,前兩者具有增殖能力。 5.方法簡介: 公司實驗室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞采用消化、混合細胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶 6.質(zhì)量檢測: 公司實驗室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含B-27、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次; 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 雙極、多極形 傳代特性 不傳代,不增殖,存活1-2周 消化液 0.25% 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:產(chǎn)品僅用于科研
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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