MG-63骨肉瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)MG-63骨肉瘤細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
Kaurene 細胞分裂素 34424-57-2
RaceMic KetaMine . HCl 1867-66-9
Ketoconazole * 65277-42-1
Ketoketal( Bicyclohexane-4,4′-dione Monoethyl) 雙環己酮乙二醇單縮酮 56309-94-5
ketopinic acid 7,7-二甲基-2-氧代-二環[2.2.1]庚烷-1-甲酸 464-78-8
Ketorolac TroMethaMine 酮咯酸* 74103-07-4
Keycure 8179 2-(4-甲基芐基)-2-(二甲基氨基)-1-(4-嗎啉苯基)-1-丁酮 119344-86-4
N6-furfuryladenine 6-糠氨基嘌呤 525-79-1
Kojic acid 曲酸 501-30-4
KU-55933 2-嗎啉-4-基-6-噻蒽-1-基吡喃-4-酮 587871-26-9
Kurarinone 34981-26-5
KynuraMine 363-36-0
KYNURAMINE DIHYDROBROMIDE 犬尿胺二氫溴酸鹽 304-47-2
L-(-)-Dianisoyl-tartaric acid L-(-)-二對甲氧基苯甲酰酒石酸 50583-51-2
L(-)-Glutathione L-* (氧化型) 27025-41-8
L(-)-norephedrine 492-41-1
L-Aspartic acid,3-hydroxy-, (3S)- L(-)-THREO-3-羥基天冬氨酸 7298-99-9
L-(+)-Ergothioneine innert salt (S)-ALPHA-羧基-N,N,N-*基-2-巰基-1H-咪唑-4-乙銨 內鹽 58511-63-0
L(+)-RhaMnose Monohydrate L-鼠李糖 10030-85-0
L-10-CaMphorsulfonic acid aMMoniuM salt L-10-樟腦磺酸胺鹽 13867-85-1
L-2-AMinobut* hydrochloride L-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽 7682-20-4
L-4,5,6,7-TETRAHYDRO-1H-IMIDAZO[4,5-C]PYRIDINE-6-CARBOXYLIC ACID L-4,5,6,7-四氫-1H-咪唑[4,5-C]并吡啶-6-羧酸 59981-63-4
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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