SW480 [SW-480]結腸癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SW480 [SW-480]結腸癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。SW480 [SW-480]結腸癌細胞加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
2,2'-BIPYRAZINE 10199-00-5
2,2'-Bipyridine-5,5'-dicarbonitrile 2,2-BIPYRIDINE-5,5-DICARBONITRILE 1802-29-5
2,2'-Bipyridine-5,5'-dicarboxylic acid 2,2'-聯吡啶-5,5'-二羧酸 1802-30-8
2,2'-BIPYRIDINE-6,6'-DICARBOXYLIC ACID [2,2'-聯吡啶]-6,6'-二羧酸 4479-74-7
2,2'-Bis(2-chlorophenyl)-4,4',5,5'-tetraphenyl-1,2'-biiMidazole 2,2'-二(2-)-4,4',5,5'-四苯基-1,2'-二咪唑 1707-68-2
2,2bis(broMoethyl)-1,3-propanediol 34549-30-9
2,2-dichloroethanethioic S-acid 13639-16-2
2,2-Difluoro-2-pyridin-2-ylethanol 2,2-二氟-2-(2-吡啶基)-1-乙醇 267875-65-0
2,2-diMethoxypropane 2,2-二甲氧基丙烷 77-76-9
2,2-DIMETHYL-2'-FLUOROPROPIOPHENONE 560085-36-1
2,2-DIMETHYL-BUT-3-YNOIC ACID BENZYL ESTER 204588-77-2
2,2-DIMETHYLCYCLOPENTANONE 2,2-二甲基環戊酮 4541-32-6
2,2-DIMETHYL-PIPERAZINE 2,2-二甲基哌嗪 84477-72-5
2,2-diMethylpyrrolidine 2,2-二甲基吡咯烷 35018-15-6
DIPHENYLKETENE 二苯乙烯酮 525-06-4
3H-IndoliuM,2,3,3-triMethyl-1-(3-sulfopropyl)-, inner salt 29636-96-2
2,3,3-TriMethylbutan-2-ol 五甲基乙醇 594-83-2
2,3,3-TRIMETHYL-5-BROMO-3H-INDOLE 2,3,3-*基-5-溴-3H-吲哚 54136-24-2
2,3,4,4,5,6-hexachlorocyclohexa-2,5-dien-1-one 599-52-0
2,3,4,5- Tetrachloronitrobenzene 2,3,4,5-四氯硝基苯 879-39-0
2,3,4,5,6-PENTAMETHYLBENZYL CHLORIDE 五甲基芐氯 484-65-1
TMS 2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯 24144-92-1
2,3,4,6-tetra-O-acetyl-D-glucopyranose 2,3,4,6-四乙酰-D-葡萄糖 10343-06-3
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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